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    - EMDB-1054: Large T antigen on the simian virus 40 origin of replication: a 3... -

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    Basic information

    Entry
    Database: EMDB / ID: 1054
    TitleLarge T antigen on the simian virus 40 origin of replication: a 3D snapshot prior to DNA replication.
    SampleLarge T antigen double hexamer on the SV40 origin of replication
    SourceSimian virus 40 / virus / SV40
    Map data3D volume of the SV40 T antigen double hexamer on the viral origin of replication
    Methodsingle particle reconstruction, at 27.5 A resolution
    AuthorsGomez-Lorenzo MG / Valle M / Frank J / Gruss C / Sorzano COS / Chen XS / Donate L / Carazo JM
    CitationEMBO J., 2003, 22, 6205-6213

    EMBO J., 2003, 22, 6205-6213 StrPapers
    Large T antigen on the simian virus 40 origin of replication: a 3D snapshot prior to DNA replication.
    Maria G Gomez-Lorenzo / Mikel Valle / Joachim Frank / Claudia Gruss / Carlos Oscar S Sorzano / Xiaojiang S Chen / Luis Enrique Donate / Jose Maria Carazo

    DateDeposition: Aug 12, 2003 / Header (metadata) release: Sep 25, 2003 / Map release: Sep 25, 2005 / Last update: Aug 12, 2003

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    Structure visualization

    Movie
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    • Surface level: 0.0016
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    Downloads & links

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    Map

    Fileemd_1054.map.gz (map file in CCP4 format, 6751 KB)
    Projections & slicesSize of images:
    AxesZ (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
    120 pix
    3.27 A/pix
    = 392.4 A
    120 pix
    3.27 A/pix
    = 392.4 A
    120 pix
    3.27 A/pix
    = 392.4 A

    Surface

    Projections

    Slices (1/3)

    Slices (1/2)

    Slices (2/3)

    Images are generated by Spider package.

    Voxel sizeX=Y=Z: 3.27 A
    Density
    Contour Level:0.000588, 0.0016 (movie #1):
    Minimum - Maximum-0.00605902 - 0.00770981
    Average (Standard dev.)-0.00439348 (0.00254601)
    Details

    EMDB XML:

    Space Group Number1
    Map Geometry
    Axis orderXYZ
    Dimensions120120120
    Origin000
    Limit119119119
    Spacing120120120
    CellA=B=C: 392.4 A
    Alpha=beta=gamma: 90 deg.

    CCP4 map header:

    modeImage stored as Reals
    A/pix X/Y/Z3.273.273.27
    M x/y/z120120120
    origin x/y/z0.0000.0000.000
    length x/y/z392.400392.400392.400
    alpha/beta/gamma90.00090.00090.000
    start NX/NY/NZ0052
    NX/NY/NZ12812855
    MAP C/R/S123
    start NC/NR/NS000
    NC/NR/NS120120120
    D min/max/mean-0.0060.008-0.004

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    Supplemental data

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    Sample components

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    Entire Large T antigen double hexamer on the SV40 origin of replication

    EntireName: Large T antigen double hexamer on the SV40 origin of replication
    Oligomeric State: homododecamer of T antigen on the DNA / Number of components: 2
    MassTheoretical: 1.049 MDa

    -
    Component #1: protein, SV40 large T antigen

    ProteinName: SV40 large T antigen / a.k.a: T antigen / Oligomeric Details: dodecameric
    Details: Purified as described in Simanis and Lane (1985) Virology, 144:88-100; To know about purification details see Simanis V and Lane DP (1985) "An immunoaffinity purification procedure for SV40 large T antigen". Virology 144, 88-100
    Number of Copies: 12 / Recombinant expression: Yes
    MassTheoretical: 984 kDa / Experimental: 984 kDa
    SourceSpecies: Simian virus 40 / virus / SV40

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    Component #2: nucleic-acid, SV40 origin of replication

    Nucleic-acidName: SV40 origin of replication / a.k.a: ori / Class: DNA
    Details: DNA fragment HindIII / NcoI of pOR1 (DeLucia et al, 1986, J.Virol, 61:3649-3654
    Structure: DOUBLE HELIX / Synthetic: Yes
    Sequence:
    AAGCTTCCTC ACTACTTCTG GAATAGCTCA GAGGCCGAGG CGGCCTCGGC CTCTGCATAA ATAAAAAAAA TTAGGCAGCC ATGG
    MassTheoretical: 54 kDa / Experimental: 54 kDa
    SourceSpecies: Simian virus 40 / virus / SV40

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    Experimental details

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    Sample preparation

    Specimen stateparticle
    Sample solutionSpecimen conc.: 7.56 mg/ml
    Buffer solution: The incubation buffer to do the Tag-ori complex: 3 mM ADP, 20 mM Tris (HCl) pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM MgCl2
    pH: 7.5
    Support filmcopper grid
    StainingThe sample was vitrified on a carbon-coated copper grid that was previously glow-discharged
    VitrificationInstrument: HOMEMADE PLUNGER / Cryogen name: ETHANE / Temperature: 90 K / Method: Blot for 1 second before plunging
    Details: Vitrification instrument: user made plunger. Vitrification carried out at room temperature

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    Electron microscopy imaging

    ImagingMicroscope: FEI TECNAI F20 / Details: Low Dose procedure
    Electron gunElectron source: FIELD EMISSION GUN / Accelerating voltage: 200 kV / Electron dose: 15 e/A2 / Illumination mode: FLOOD BEAM
    LensMagnification: 60000 X (nominal), 64200 X (calibrated) / Astigmatism: corrected at 175,000 / Cs: 2 mm / Imaging mode: BRIGHT FIELD / Defocus: 1200 - 4500 nm
    Specimen HolderHolder: Side entry liquid nitrogen-cooled cryo specimen holder
    Model: GATAN LIQUID NITROGEN / Tilt Angle: 0 - 50 deg. / Temperature: 90 K
    CameraDetector: KODAK SO-163 FILM

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    Image acquisition

    Image acquisitionNumber of digital images: 153 / Scanner: ZEISS SCAI / Sampling size: 7 microns / Bit depth: 32

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    Image processing

    ProcessingMethod: single particle reconstruction / Number of projections: 13860
    Details: Particles were manually picked and rotationally and translationaly aligned using Radon transforms
    Applied symmetry: C1 (asymmetric)
    3D reconstructionAlgorithm: ART with blobs / Software: spider xmipp / CTF correction: each particle, only phases / Resolution: 27.5 A / Resolution method: FSC 0.5
    Euler angles: Phi / theta 186.00 91.000 324.00 41.000 123.00 74.000 213.00 76.000 185.00 84.000 25.000 104.00 172.00 36.000 180.00 97.000 328.00 90.000 284.00 62.000 188.00 112.00 108.00 109.00 297.00 96.000 205.00 102.00 319.00 60.000 297.00 79.000 176.00 142.00 342.00 82.000 314.00 54.000 54.000 99.000 39.000 65.000 346.00 115.00 336.00 94.000 286.00 89.000 254.00 83.000 305.00 45.000 223.00 106.00 219.00 59.000 292.00 104.00 208.00 114.00 262.00 101.00 346.00 62.000 78.000 62.000 170.00 67.000 253.00 77.000 352.00 111.00 178.00 91.000 172.00 45.000 346.00 46.000 169.00 117.00 73.000 63.000 291.00 82.000 13.000 67.000 126.00 58.000 127.00 85.000 276.00 83.000 349.00 70.000 101.00 86.000 350.00 128.00 333.00 55.000 72.000 114.00 322.00 95.000 8.0000 113.00 303.00 73.000 326.00 58.000 148.00 57.000 68.000 35.000 152.00 84.000 168.00 60.000 173.00 46.000 135.00 45.000 36.000 98.000 164.00 78.000 172.00 106.00 197.00 9.0000 103.00 85.000 23.000 147.00 123.00 96.000 242.00 149.00 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    Details: Starting from a preliminary random conical tilt volume, search for projection orientation was done using Radon transforms (Radermacher M, 1994). CTF correction of the images during angular refinement.

    -
    Atomic model buiding

    Modeling #1Refinement protocol: rigid body
    Details: The helicase hexamer was fitted manually using program O in both C-terminal domains of the Tag-ori complex,
    Input PDB model: 1N25

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    Sep 15, 2016. EM Navigator & Yorodumi renewed

    EM Navigator & Yorodumi renewed

    • New versions of EM Navigator and Yorodumi started

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    Aug 31, 2016. New EM Navigator & Yorodumi

    New EM Navigator & Yorodumi

    • In 15th Sep 2016, the development versions of EM Navigator and Yorodumi will replace the official versions.
    • Current version will continue as 'legacy version' for some time.

    Related info.: Changes in new EM Navigator and Yorodumi / EM Navigator / Yorodumi / EM Navigator (legacy version) / Yorodumi (legacy version)

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    Apr 13, 2016. Omokage search got faster

    Omokage search got faster

    • The computation time became ~1/2 compared to the previous version by re-optimization of data accession
    • Enjoy "shape similarity" of biomolecules, more!

    Related info.: Omokage search

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    Mar 3, 2016. Presentation (PDF format) at IPR seminar on Feb 19.

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    Yorodumi

    Thousand views of thousand structures

    • Yorodumi is a browser for structure data from EMDB, PDB, SASBDB, etc.
    • All the functionalities will be ported from the levgacy version.
    • This page is also the successor to EM Navigator detail page, and also detail information page/front-end page for Omokage search.

    Related info.: Yorodumi (legacy version) / EMDB / PDB / SASBDB / Comparison of 3 databanks / Yorodumi Search / Yorodumi Papers / Jmol/JSmol / Changes in new EM Navigator and Yorodumi

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