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- PDB-7rwc: AP2 bound to the APA domain of SGIP and heparin; partial signal s... -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 7rwc
タイトルAP2 bound to the APA domain of SGIP and heparin; partial signal subtraction and symmetry expansion
要素
  • AP-2 complex subunit alpha-2
  • AP-2 complex subunit beta
  • AP-2 complex subunit mu
  • AP-2 complex subunit sigma
  • SH3-containing GRB2-like protein 3-interacting protein 1
キーワードENDOCYTOSIS (エンドサイトーシス) / AP2 / clathrin vesicle / lipid-binding / adaptor / membrane (生体膜) / transport / muniscin / regulator
機能・相同性
機能・相同性情報


Formation of annular gap junctions / Gap junction degradation / LDL clearance / WNT5A-dependent internalization of FZD2, FZD5 and ROR2 / WNT5A-dependent internalization of FZD4 / Trafficking of GluR2-containing AMPA receptors / Retrograde neurotrophin signalling / clathrin coat / clathrin adaptor complex / extrinsic component of presynaptic endocytic zone membrane ...Formation of annular gap junctions / Gap junction degradation / LDL clearance / WNT5A-dependent internalization of FZD2, FZD5 and ROR2 / WNT5A-dependent internalization of FZD4 / Trafficking of GluR2-containing AMPA receptors / Retrograde neurotrophin signalling / clathrin coat / clathrin adaptor complex / extrinsic component of presynaptic endocytic zone membrane / VLDLR internalisation and degradation / cardiac septum development / Recycling pathway of L1 / AP-2 adaptor complex / regulation of vesicle size / postsynaptic neurotransmitter receptor internalization / clathrin coat assembly / Cargo recognition for clathrin-mediated endocytosis / positive regulation of synaptic vesicle endocytosis / clathrin adaptor activity / Clathrin-mediated endocytosis / vesicle budding from membrane / membrane coat / clathrin-dependent endocytosis / MHC class II antigen presentation / neurotransmitter receptor internalization / positive regulation of protein localization to membrane / coronary vasculature development / signal sequence binding / negative regulation of protein localization to plasma membrane / aorta development / regulation of hematopoietic stem cell differentiation / ventricular septum development / low-density lipoprotein particle receptor binding / clathrin binding / protein serine/threonine kinase binding / positive regulation of endocytosis / positive regulation of receptor internalization / synaptic vesicle endocytosis / vesicle-mediated transport / Neutrophil degranulation / phosphatidylinositol binding / 分泌 / kidney development / intracellular protein transport / cytoplasmic side of plasma membrane / kinase binding / disordered domain specific binding / シナプス小胞 / heart development / cytoplasmic vesicle / postsynapse / protein-containing complex assembly / transmembrane transporter binding / protein domain specific binding / intracellular membrane-bounded organelle / glutamatergic synapse / lipid binding / シナプス / protein-containing complex binding / protein kinase binding / ミトコンドリア
類似検索 - 分子機能
AP-2 complex subunit sigma / Clathrin adaptor, alpha-adaptin, appendage, C-terminal subdomain / Adaptor protein complex AP-2, alpha subunit / Alpha adaptin AP2, C-terminal domain / Mu2, C-terminal domain / AP-2 complex subunit mu, N-terminal / Adaptor protein complex, sigma subunit / Clathrin adaptor, beta-adaptin, appendage, Ig-like subdomain / Beta-adaptin appendage, C-terminal subdomain / AP-1/2/4 complex subunit beta ...AP-2 complex subunit sigma / Clathrin adaptor, alpha-adaptin, appendage, C-terminal subdomain / Adaptor protein complex AP-2, alpha subunit / Alpha adaptin AP2, C-terminal domain / Mu2, C-terminal domain / AP-2 complex subunit mu, N-terminal / Adaptor protein complex, sigma subunit / Clathrin adaptor, beta-adaptin, appendage, Ig-like subdomain / Beta-adaptin appendage, C-terminal subdomain / AP-1/2/4 complex subunit beta / Beta2-adaptin appendage, C-terminal sub-domain / Beta2-adaptin appendage, C-terminal sub-domain / AP complex subunit beta / Clathrin adaptor complex, small chain / Clathrin adaptor complexes small chain signature. / Clathrin adaptor complexes medium chain signature 1. / Clathrin adaptor, mu subunit / Clathrin adaptor, mu subunit, conserved site / Clathrin adaptor complexes medium chain signature 2. / Coatomer/calthrin adaptor appendage, C-terminal subdomain / Adaptor complexes medium subunit family / AP complex, mu/sigma subunit / Clathrin adaptor complex small chain / AP-2 complex subunit mu, C-terminal superfamily / Mu homology domain / Mu homology domain (MHD) profile. / Clathrin adaptor, alpha/beta/gamma-adaptin, appendage, Ig-like subdomain / Adaptin C-terminal domain / Adaptin C-terminal domain / Clathrin/coatomer adaptor, adaptin-like, N-terminal / Adaptin N terminal region / Clathrin adaptor, appendage, Ig-like subdomain superfamily / Longin-like domain superfamily / TBP domain superfamily / Armadillo/beta-catenin-like repeats / Armadillo / Armadillo-like helical / Armadillo-type fold
類似検索 - ドメイン・相同性
AP-2 complex subunit alpha-2 / AP-2 complex subunit sigma / AP-2 complex subunit mu / AP-2 complex subunit beta
類似検索 - 構成要素
生物種Mus musculus (ハツカネズミ)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.8 Å
データ登録者Baker, R.W. / Hollopeter, G. / Partlow, E.A.
資金援助 米国, 1件
組織認可番号国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)R01 GM127548-01A1 米国
引用ジャーナル: Nat Struct Mol Biol / 年: 2022
タイトル: Structural basis of an endocytic checkpoint that primes the AP2 clathrin adaptor for cargo internalization.
著者: Edward A Partlow / Kevin S Cannon / Gunther Hollopeter / Richard W Baker /
要旨: Clathrin-mediated endocytosis (CME) is the main route of internalization from the plasma membrane. It is known that the heterotetrameric AP2 clathrin adaptor must open to simultaneously engage ...Clathrin-mediated endocytosis (CME) is the main route of internalization from the plasma membrane. It is known that the heterotetrameric AP2 clathrin adaptor must open to simultaneously engage membrane and endocytic cargo, yet it is unclear how transmembrane cargos are captured to catalyze CME. Using cryogenic-electron microscopy, we discover a new way in which mouse AP2 can reorganize to expose membrane- and cargo-binding pockets, which is not observed in clathrin-coated structures. Instead, it is stimulated by endocytic pioneer proteins called muniscins, which do not enter vesicles. Muniscin-engaged AP2 is primed to rearrange into the vesicle-competent conformation on binding the tyrosine cargo internalization motif (YxxΦ). We propose adaptor priming as a checkpoint to ensure cargo internalization.
履歴
登録2021年8月19日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02022年3月30日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12022年4月13日Group: Database references / カテゴリ: citation / citation_author / Item: _citation.pdbx_database_id_PubMed / _citation.title
改定 1.22022年4月27日Group: Database references / カテゴリ: citation
Item: _citation.journal_volume / _citation.page_first / _citation.page_last
改定 1.32024年6月5日Group: Data collection / Refinement description
カテゴリ: chem_comp_atom / chem_comp_bond ...chem_comp_atom / chem_comp_bond / em_3d_fitting_list / pdbx_initial_refinement_model
Item: _em_3d_fitting_list.accession_code / _em_3d_fitting_list.initial_refinement_model_id ..._em_3d_fitting_list.accession_code / _em_3d_fitting_list.initial_refinement_model_id / _em_3d_fitting_list.source_name / _em_3d_fitting_list.type

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: AP-2 complex subunit alpha-2
B: AP-2 complex subunit beta
M: AP-2 complex subunit mu
S: AP-2 complex subunit sigma
P: SH3-containing GRB2-like protein 3-interacting protein 1


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)204,9915
ポリマ－204,9915
非ポリマー00
水0
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: gel filtration, AP2 was purified by affinity and gel filtration chromatography. Binding to SGIP was verified using microscale thermophoresis.
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551
Buried area14420 Å2
ΔGint-89 kcal/mol
Surface area69740 Å2

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要素

#1: タンパク質 AP-2 complex subunit alpha-2 / 100 kDa coated vesicle protein C / Adaptor protein complex AP-2 subunit alpha-2 / Adaptor-related ...100 kDa coated vesicle protein C / Adaptor protein complex AP-2 subunit alpha-2 / Adaptor-related protein complex 2 subunit alpha-2 / Alpha-adaptin C / Alpha2-adaptin / Clathrin assembly protein complex 2 alpha-C large chain / Plasma membrane adaptor HA2/AP2 adaptin alpha C subunit


分子量: 70573.320 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Mus musculus (ハツカネズミ) / 遺伝子: Ap2a2, Adtab / プラスミド: pACYC Duet / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: P17427
#2: タンパク質 AP-2 complex subunit beta / AP105B / Adaptor protein complex AP-2 subunit beta / Adaptor-related protein complex 2 subunit beta ...AP105B / Adaptor protein complex AP-2 subunit beta / Adaptor-related protein complex 2 subunit beta / Beta-2-adaptin / Beta-adaptin / Clathrin assembly protein complex 2 beta large chain / Plasma membrane adaptor HA2/AP2 adaptin beta subunit


分子量: 66953.195 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Mus musculus (ハツカネズミ) / 遺伝子: Ap2b1, Clapb1 / プラスミド: pET Duet / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: Q9DBG3
#3: タンパク質 AP-2 complex subunit mu / AP-2 mu chain / Adaptor protein complex AP-2 subunit mu / Adaptor-related protein complex 2 subunit ...AP-2 mu chain / Adaptor protein complex AP-2 subunit mu / Adaptor-related protein complex 2 subunit mu / Clathrin assembly protein complex 2 mu medium chain / Clathrin coat assembly protein AP50 / Clathrin coat-associated protein AP50 / Mu2-adaptin / Plasma membrane adaptor AP-2 50 kDa protein


分子量: 49726.641 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Mus musculus (ハツカネズミ) / 遺伝子: Ap2m1, Clapm1 / プラスミド: pET Duet / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: P84091
#4: タンパク質 AP-2 complex subunit sigma / Adaptor protein complex AP-2 subunit sigma / Adaptor-related protein complex 2 subunit sigma / ...Adaptor protein complex AP-2 subunit sigma / Adaptor-related protein complex 2 subunit sigma / Clathrin assembly protein 2 sigma small chain / Clathrin coat assembly protein AP17 / Clathrin coat-associated protein AP17 / Plasma membrane adaptor AP-2 17 kDa protein / Sigma-adaptin 3b / Sigma2-adaptin


分子量: 17038.688 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Mus musculus (ハツカネズミ) / 遺伝子: Ap2s1, Ap17, Claps2 / プラスミド: pACYC Duet / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: P62743
#5: タンパク質・ペプチド SH3-containing GRB2-like protein 3-interacting protein 1


分子量: 698.854 Da / 分子数: 1 / Fragment: APA domain / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Mus musculus (ハツカネズミ) / 遺伝子: Sgip1 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: AP2 bound to the APA domain of SGIP and heparin / タイプ: COMPLEX / 詳細: Partial signal subtraction and symmetry expansion / Entity ID: all / 由来: RECOMBINANT
分子量実験値: NO
由来(天然)生物種: Mus musculus (ハツカネズミ)
由来(組換発現)生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / プラスミド: pACYC Duet; pET Duet
緩衝液pH: 7.4
緩衝液成分
ID濃度名称式Buffer-ID
120 mMHEPESC8H18N2O4S1
2150 mMSodium Chloride塩化ナトリウムNaCl塩化ナトリウム1
30.05 %n-octyl-beta-d-glucosideC14H28O61
試料濃度: 2 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
詳細: Heparin added at a 2-fold excess 20 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.05% beta-OG
試料支持グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE-PROPANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277 K / 詳細: Blot force -10, 4 second blot, 4 uL sample

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Talos Arctica / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TALOS ARCTICA
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 200 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / 倍率（公称値）: 36000 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 2500 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 500 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 70 µm / アライメント法: COMA FREE
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
撮影電子線照射量: 55 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)

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解析

ソフトウェア名称: PHENIX / バージョン: 1.19.2_4158: / 分類: 精密化
EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
2SerialEM画像取得
4cryoSPARC3.2.0CTF補正
7Coot0.8.9.1モデルフィッティング
8UCSF Chimera1.14モデルフィッティング
11cryoSPARC3.2.0最終オイラー角割当
13cryoSPARC3.2.0３次元再構成
14PHENIX1.19.2モデル精密化
画像処理詳細: Counting Mode
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
3次元再構成解像度: 3.8 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 732073 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: RIGID BODY FIT / 詳細: phenix.real_space_refine
原子モデル構築PDB-ID: 2VGL

2vgl


Accession code: 2VGL / Source name: PDB / タイプ: experimental model
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00412334
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.5516908
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d3.8711816
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.0412134
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0042134

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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