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- EMDB-33695: Structure of the Cas7-11-Csx29-guide RNA complex -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-33695
タイトルStructure of the Cas7-11-Csx29-guide RNA complex
マップデータ
試料
  • 複合体: Cas7-11 in complex with a crRNA and its target RNA
    • 複合体: Cas7-11, Csx29
      • タンパク質・ペプチド: CHAT domain-containing protein
      • タンパク質・ペプチド: CRISPR-associated RAMP family protein
    • 複合体: RNAリボ核酸
      • RNA: crRNA
  • リガンド: ZINC ION
機能・相同性CHAT domain / CHAT domain / CRISPR type III-associated protein / RAMP superfamily / defense response to virus / CRISPR-associated RAMP family protein / CHAT domain-containing protein
機能・相同性情報
生物種Desulfonema ishimotonii (バクテリア)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.49 Å
データ登録者Kato K / Okazaki S / Ishikawa J / Isayama Y / Nishizawa T / Nishimasu H
資金援助 日本, 1件
OrganizationGrant number国
Japan Agency for Medical Research and Development (AMED) 日本
引用ジャーナル: Science / 年: 2022
タイトル: RNA-triggered protein cleavage and cell growth arrest by the type III-E CRISPR nuclease-protease.
著者: Kazuki Kato / Sae Okazaki / Cian Schmitt-Ulms / Kaiyi Jiang / Wenyuan Zhou / Junichiro Ishikawa / Yukari Isayama / Shungo Adachi / Tomohiro Nishizawa / Kira S Makarova / Eugene V Koonin / ...著者: Kazuki Kato / Sae Okazaki / Cian Schmitt-Ulms / Kaiyi Jiang / Wenyuan Zhou / Junichiro Ishikawa / Yukari Isayama / Shungo Adachi / Tomohiro Nishizawa / Kira S Makarova / Eugene V Koonin / Omar O Abudayyeh / Jonathan S Gootenberg / Hiroshi Nishimasu /
要旨: The type III-E CRISPR-Cas7-11 effector binds a CRISPR RNA (crRNA) and the putative protease Csx29 and catalyzes crRNA-guided RNA cleavage. We report cryo-electron microscopy structures of the Cas7-11- ...The type III-E CRISPR-Cas7-11 effector binds a CRISPR RNA (crRNA) and the putative protease Csx29 and catalyzes crRNA-guided RNA cleavage. We report cryo-electron microscopy structures of the Cas7-11-crRNA-Csx29 complex with and without target RNA (tgRNA), and demonstrate that tgRNA binding induces conformational changes in Csx29. Biochemical experiments revealed tgRNA-dependent cleavage of the accessory protein Csx30 by Csx29. Reconstitution of the system in bacteria showed that Csx30 cleavage yields toxic protein fragments that cause growth arrest, which is regulated by Csx31. Csx30 binds Csx31 and the associated sigma factor RpoE (RNA polymerase, extracytoplasmic E), suggesting that Csx30-mediated RpoE inhibition modulates the cellular response to infection. We engineered the Cas7-11-Csx29-Csx30 system for programmable RNA sensing in mammalian cells. Overall, the Cas7-11-Csx29 effector is an RNA-dependent nuclease-protease.
履歴
登録2022年6月26日-
ヘッダ(付随情報) 公開2022年11月9日-
マップ公開2022年11月9日-
更新2022年12月7日-
現状2022年12月7日処理サイト: PDBj / 状態: 公開

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構造の表示

添付画像

emd_33695.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_33695.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 178 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
ボクセルのサイズX=Y=Z: 0.83 Å
密度
表面レベル登録者による: 0.7
最小 - 最大-4.535664 - 8.211656
平均 (標準偏差)-0.0005566248 (±0.13459747)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ360360360
Spacing360360360
セルA=B=C: 298.8 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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マスク #1

ファイルemd_33695_msk_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #2

ファイルemd_33695_half_map_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #1

ファイルemd_33695_half_map_2.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : Cas7-11 in complex with a crRNA and its target RNA

全体名称: Cas7-11 in complex with a crRNA and its target RNA
要素
  • 複合体: Cas7-11 in complex with a crRNA and its target RNA
    • 複合体: Cas7-11, Csx29
      • タンパク質・ペプチド: CHAT domain-containing protein
      • タンパク質・ペプチド: CRISPR-associated RAMP family protein
    • 複合体: RNAリボ核酸
      • RNA: crRNA
  • リガンド: ZINC ION

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超分子 #1: Cas7-11 in complex with a crRNA and its target RNA

超分子名称: Cas7-11 in complex with a crRNA and its target RNA / タイプ: complex / キメラ: Yes / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#3
由来(天然)生物種: Desulfonema ishimotonii (バクテリア)

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超分子 #2: Cas7-11, Csx29

超分子名称: Cas7-11, Csx29 / タイプ: complex / キメラ: Yes / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1-#2
由来(天然)生物種: Desulfonema ishimotonii (バクテリア)

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超分子 #3: RNA

超分子名称: RNA / タイプ: complex / キメラ: Yes / ID: 3 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #3

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分子 #1: CHAT domain-containing protein

分子名称: CHAT domain-containing protein / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Desulfonema ishimotonii (バクテリア)
分子量理論値: 88.311875 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MSNPIRDIQD RLKTAKFDNK DDMMNLASSL YKYEKQLMDS SEATLCQQGL SNRPNSFSQL SQFRDSDIQS KAGGQTGKFW QNEYEACKN FQTHKERRET LEQIIRFLQN GAEEKDADDL LLKTLARAYF HRGLLYRPKG FSVPARKVEA MKKAIAYCEI I LDKNEEES ...文字列:
MSNPIRDIQD RLKTAKFDNK DDMMNLASSL YKYEKQLMDS SEATLCQQGL SNRPNSFSQL SQFRDSDIQS KAGGQTGKFW QNEYEACKN FQTHKERRET LEQIIRFLQN GAEEKDADDL LLKTLARAYF HRGLLYRPKG FSVPARKVEA MKKAIAYCEI I LDKNEEES EALRIWLYAA MELRRCGEEY PENFAEKLFY LANDGFISEL YDIRLFLEYT EREEDNNFLD MILQENQDRE RL FELCLYK ARACFHLNQL NDVRIYGESA IDNAPGAFAD PFWDELVEFI RMLRNKKSEL WKEIAIKAWD KCREKEMKVG NNI YLSWYW ARQRELYDLA FMAQDGIEKK TRIADSLKSR TTLRIQELNE LRKDAHRKQN RRLEDKLDRI IEQENEARDG AYLR RNPPC FTGGKREEIP FARLPQNWIA VHFYLNELES HEGGKGGHAL IYDPQKAEKD QWQDKSFDYK ELHRKFLEWQ ENYIL NEEG SADFLVTLCR EIEKAMPFLF KSEVIPEDRP VLWIPHGFLH RLPLHAAMKS GNNSNIEIFW ERHASRYLPA WHLFDP APY SREESSTLLK NFEEYDFQNL ENGEIEVYAP SSPKKVKEAI RENPAILLLL CHGEADMTNP FRSCLKLKNK DMTIFDL LT VEDVRLSGSR ILLGACESDM VPPLEFSVDE HLSVSGAFLS HKAGEIVAGL WTVDSEKVDE CYSYLVEEKD FLRNLQEW Q MAETENFRSE NDSSLFYKIA PFRIIGFPAE

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分子 #2: CRISPR-associated RAMP family protein

分子名称: CRISPR-associated RAMP family protein / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Desulfonema ishimotonii (バクテリア)
分子量理論値: 185.609875 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MTTTMKISIE FLEPFRMTKW QESTRRNKNN KEFVRGQAFA RWHRNKKDNT KGRPYITGTL LRSAVIRSAE NLLTLSDGKI SEKTCCPGK FDTEDKDRLL QLRQRSTLRW TDKNPCPDNA ETYCPFCELL GRSGNDGKKA EKKDWRFRIH FGNLSLPGKP D FDGPKAIG ...文字列:
MTTTMKISIE FLEPFRMTKW QESTRRNKNN KEFVRGQAFA RWHRNKKDNT KGRPYITGTL LRSAVIRSAE NLLTLSDGKI SEKTCCPGK FDTEDKDRLL QLRQRSTLRW TDKNPCPDNA ETYCPFCELL GRSGNDGKKA EKKDWRFRIH FGNLSLPGKP D FDGPKAIG SQRVLNRVDF KSGKAHDFFK AYEVDHTRFP RFEGEITIDN KVSAEARKLL CDSLKFTDRL CGALCVIRFD EY TPAADSG KQTENVQAEP NANLAEKTAE QIISILDDNK KTEYTRLLAD AIRSLRRSSK LVAGLPKDHD GKDDHYLWDI GKK KKDENS VTIRQILTTS ADTKELKNAG KWREFCEKLG EALYLKSKDM SGGLKITRRI LGDAEFHGKP DRLEKSRSVS IGSV LKETV VCGELVAKTP FFFGAIDEDA KQTALQVLLT PDNKYRLPRS AVRGILRRDL QTYFDSPCNA ELGGRPCMCK TCRIM RGIT VMDARSEYNA PPEIRHRTRI NPFTGTVAEG ALFNMEVAPE GIVFPFQLRY RGSEDGLPDA LKTVLKWWAE GQAFMS GAA STGKGRFRME NAKYETLDLS DENQRNDYLK NWGWRDEKGL EELKKRLNSG LPEPGNYRDP KWHEINVSIE MASPFIN GD PIRAAVDKRG TAVVTFVKYK AEGEEAKPVC AYKAESFRGV IRSAVARIHM EDGVPLTELT HSDCECLLCQ IFGSEYEA G KIRFEDLVFE SDPEPVTFDH VAIDRFTGGA AAKKKFDDSP LPGSPARPLM LKGSFWIRRD VLEDEEYCKA LGKALADVN NGLYPLGGKS AIGYGQVKSL GIKGDDKRIS RLMNPAFDET DVAVPEKPKT DAEVRIEAEK VYYPHYFVEP HKKVEREEKP CGHQKFHEG RLTGKIRCKL ITKTPLIVPD TSNDDFFRPA DKEARKEKDE YHKSYAFFRL HKQIMIPGSE LRGMVSSVYE T VTNSCFRI FDETKRLSWR MDADHQNVLQ DFLPGRVTAD GKHIQKFSET ARVPFYDKTQ KHFDILDEQE IAGEKPVRMW VK RFIKRLS LVDPAKHPQK KQDNKWKRRK EGIATFIEQK NGSYYFNVVT NNGCTSFHLW HKPDNFDQEK LEGIQNGEKL DCW VRDSRY QKAFQEIPEN DPDGWECKEG YLHVVGPSKV EFSDKKGDVI NNFQGTLPSV PNDWKTIRTN DFKNRKRKNE PVFC CEDDK GNYYTMAKYC ETFFFDLKEN EEYEIPEKAR IKYKELLRVY NNNPQAVPES VFQSRVAREN VEKLKSGDLV YFKHN EKYV EDIVPVRISR TVDDRMIGKR MSADLRPCHG DWVEDGDLSA LNAYPEKRLL LRHPKGLCPA CRLFGTGSYK GRVRFG FAS LENDPEWLIP GKNPGDPFHG GPVMLSLLER PRPTWSIPGS DNKFKVPGRK FYVHHHAWKT IKDGNHPTTG KAIEQSP NN RTVEALAGGN SFSFEIAFEN LKEWELGLLI HSLQLEKGLA HKLGMAKSMG FGSVEIDVES VRLRKDWKQW RNGNSEIP N WLGKGFAKLK EWFRDELDFI ENLKKLLWFP EGDQAPRVCY PMLRKKDDPN GNSGYEELKD GEFKKEDRQK KLTTPWTPW ASSGLVPRGS HHHHHHH

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分子 #3: crRNA

分子名称: crRNA / タイプ: rna / ID: 3 / コピー数: 1
由来(天然)生物種: Desulfonema ishimotonii (バクテリア)
分子量理論値: 12.134133 KDa
配列文字列:
UUGAUGUCAC GGAACCUUUG UUGUCUUCGA CAUGGGUA

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分子 #4: ZINC ION

分子名称: ZINC ION / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 4 / 式: ZN
分子量理論値: 65.409 Da

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

緩衝液pH: 7
凍結凍結剤: ETHANE

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / 最大 デフォーカス（公称値）: 1.5 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 0.6 µm
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 平均電子線量: 76.5 e/Å2
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD
最終 再構成解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 2.49 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 691666

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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