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Structure paper

タイトルSuper-resolution fluorescence imaging of cryosamples does not limit achievable resolution in cryoEM.
ジャーナル・号・ページJ Struct Biol, Vol. 215, Issue 4, Page 108040, Year 2023
掲載日2023年10月31日
著者Mart G F Last / Willem E M Noteborn / Lenard M Voortman / Thomas H Sharp /
PubMed 要旨Correlated super-resolution cryo-fluorescence and cryo-electron microscopy (cryoEM) has been gaining popularity as a method to investigate biological samples with high resolution and specificity. A ...Correlated super-resolution cryo-fluorescence and cryo-electron microscopy (cryoEM) has been gaining popularity as a method to investigate biological samples with high resolution and specificity. A concern in this combined method (called SR-cryoCLEM), however, is whether and how fluorescence imaging prior to cryoEM acquisition is detrimental to sample integrity. In this report, we investigated the effect of high-dose laser light (405, 488, and 561 nm) irradiation on apoferritin samples prepared for cryoEM with excitation wavelengths commonly used in fluorescence microscopy, and compared these samples to controls that were kept in the dark. We found that laser illumination, of equal duration and intensity as used in cryo-single molecule localization microscopy (cryoSMLM) and in the presence of high concentrations of fluorescent protein, did not affect the achievable resolution in cryoEM, with final reconstructions reaching resolutions of ∼ 1.8 Å regardless of the laser illumination. The finding that super-resolution fluorescence imaging of cryosamples prior to cryoEM data acquisition does not limit the achievable resolution suggests that super-resolution cryo-fluorescence microscopy and in situ structural biology using cryoEM are entirely compatible.
リンクJ Struct Biol / PubMed:37918761
手法EM (単粒子)
解像度1.76 - 1.82 Å
構造データ

EMDB-16783, PDB-8cpm:
Human apoferritin after 405 nm laser exposure
手法: EM (単粒子) / 解像度: 1.81 Å

EMDB-16784, PDB-8cps:
Human apoferritin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 1.82 Å

EMDB-16785, PDB-8cpt:
Human apoferritin after 488 nm laser exposure
手法: EM (単粒子) / 解像度: 1.79 Å

EMDB-16786, PDB-8cpu:
Human apoferritin after 561 nm laser exposure
手法: EM (単粒子) / 解像度: 1.76 Å

EMDB-16787, PDB-8cpv:
Human apoferritin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 1.76 Å

EMDB-16788, PDB-8cpw:
Human apoferritin after 405 nm + 488 nm laser exposure in presence of rsEGFP2
手法: EM (単粒子) / 解像度: 1.79 Å

EMDB-16789, PDB-8cpx:
Human apoferritin after 488 nm laser exposure in presence of rsEGFP2
手法: EM (単粒子) / 解像度: 1.76 Å

化合物

ChemComp-NA:
Unknown entry / ナトリウムカチオン

ChemComp-MG:
Unknown entry / マグネシウムジカチオン

ChemComp-HOH:
WATER /

由来
  • homo sapiens (ヒト)
キーワードMETAL BINDING PROTEIN / Iron binding protein

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万見文献について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見文献

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関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 万見 (Yorodumi) / EMN文献 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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